Xevo TQ-XS ****************************************************************************************** * ACQUITY UUPLC I-Class System (SM-FTN)? ****************************************************************************************** Dodavatel Waters Rok pořízení 2018 Cena 12,5 mil. Kč vč. DPH Financování OP VVV CORE FACILITIES [ URL "LFHK-192.html "] CZ.02.1.01/0.0/0.0/16_017/0002515 Zodpovědná osoba doc. Ing. Miloš Hroch, Ph.D. V poslední dekádě můžeme sledovat obrovský rozmach farmaceutického a biomedicínského výzku s sebou však nese velký tlak na přístrojové vybavení a zpracování velkého množství dat. V separačních technik a hmotnostní spektrometrie můžeme v souvislosti s tím pozorovat trend modernizace a optimalizace přístrojové techniky, který jde naproti těmto požadavkům, a to miniaturizace, efektivity a rychlosti analýz. Naše laboratoř analytické chemie se zabývá vývojem nových metod pro stanovení xenobiotik a látek v biologickém materiálu s poměrně širokým záběrem. Nejčastěji se jedná o sloučeniny léčiv, metabolitů, nebo endogenních látek jako markerů různých patologických stavů. S tech kterou jsme měli doposud k dispozici, jsme však dosti často začali narážet na fyzikální li instrumentace a některé projekty nebylo možné uspokojivě řešit na úrovni poznání současné Nicméně po mnoha letech velkého úsilí se podařilo získat finanční zdroje na zajištění náku odpovídající standardům dnešní doby, které nalezneme ve výzkumných laboratořích rozvinutýc Tím přístrojem, na který jsme tak dlouho čekali, je moderní Hmotnostní detektor (QQQ MS) a Tento přístrojový celek bude tvořit instrumentální bázi naší Analytické laboratoře a bude k cílené, velmi citlivé kvantifikaci látek. Celek se skládá ze dvou hlavních modulů. Modul kapalinového chromatografu (UPLC) Acquity a tandemového hmotnostního spektrometru Xevo TQ- Waters. UPLC disponuje několika základními částmi, které nalezneme u většiny soudobých kapalinovýc Je to binární pumpa schopná tvořit vysokotlaký gradient až do tlaku 1300 Bar při průtoku 0 min. Dále je to verzatilní autosampler umožňující práci nejenom s klasickými chromatografi (2x 48 pozic), ale například i s 96 a 384 jamkovými mikrotitračními destičkami, či jiným u definovaným formátem. Objem nastřikovaného vzorku lze volit v rozmezí 0.1 - 10.0 ?L. Vzork v rozmezí teplot 4 – 40 °C. Další částí UPLC je kolonový termostat disponující prostorem p délky 150 mm. Je zde umožněno jejich nezávislé přepínání a vyhřívání v rozmezí teplot 20 - termostat dále obsahuje in-line předehříváním mobilní fáze, které zabraňuje vzniku teplotn separaci. Detektorovou část UPLC/MS sestavy tvoří hmotnostní spektrometr Xevo TQ-XS patřící mezi pok hmotnostní spektrometry typu trojitý kvadrupól. V době pořízení (2018) patřil přístroj mez přístroje svého druhu dostupné na trhu. Spektrometr je vybaven kombinovaným ESI/APCI ionto uspořádání „Z-spray“, který omezuje vstup nenabitých částic do vakuové části přístroje. Io ve vstupní části využívá technologie „StepWave“, která dále omezuje průchod nenabitých čás analyzátor a zároveň optimálně fokusuje svazek iontů přicházející na první kvadrupól. Mezi bezesporu největší výhody přístroje patří velmi vysoká citlivost a díky využití techn separaci také výrazně kratší časy analýz oproti klasické HPLC instrumentaci. K dalším výhodám, které stojí za zmínku, patří možnost rychlého přepnutí mezi ESI a APCI m měnit sondu iontového zdroje. Dále díky vhodné konstrukci vstupní části přístroje je minim nenabitých částic na hmotový analyzátor. Tím je aktivně snižován náhodný chemický šum na d fotonásobiče v detektoru dopadajících iontů přináší výhodu delší životnosti přístroje při klasickým elektronásobičem. Na závěr bychom rádi demonstrovali výhody nové instrumentace na konkrétním příkladu. V roc naší laboratoři vyvinuta a zavedena metoda na stanovení 17 žlučových kyselin v potkaní a l analýzy jednoho vzorku byl 40 minut. Vzhledem k tomuto času bylo možné za den analyzovat p vzorků včetně 7-bodové kalibrační křivky. To není opravdu mnoho. Mez kvantifikace této met okolo 200 nM, což bohužel neumožňovalo využití metody pro analýzu jednotlivých žlučových k kde nalézáme koncentrace výrazně nižší než ve žluči. S využitím nové instrumentace se podařilo nejenom zkrátit čas jedné analýzy na 11 minut, a citlivosti přístroje jsme navíc posunuli mez kvantifikace o dva řády oproti původní metodě již citlivostí dosáhneme na nízké plasmatické koncentrace analyzovaných žlučových kyselin Pro ilustraci je níže ukázáno porovnání separace s využitím původní a nové instrumentace. chromatogramy porovnatelné, je v obou případech stejná časová osa 0 – 40 min. Autor textu: doc. Ing. Miloš Hroch, Ph.D *========================================================================================= * Metody *=========================================================================================