Laboratoř průtokové cytometrie ****************************************************************************************** * ****************************************************************************************** Rok pořízení 2018 - 2020 Financování OP VVV CORE FACILITIES [ URL "LFHK-192.html "] CZ.02.1.01/0.0/0.0/16_017/0002515 Zodpovědná osoba prof. MUDr. Martina Řezáčová, Ph.D. [ URL "https:// orcid.org/0000-0001-5370-2290"] *========================================================================================= * xCELLigence *========================================================================================= Nalézání nových, účinnějších a bezpečnějších léčiv a cytostatik představuje významný úkol generace lékařů i vědeckovýzkumných pracovníků. Na počátku vývoje každé klinicky významné testování in vitro. Buněčné kultury představují komplexní biologický systém, který sdílí ř tkání jejich původu, avšak za in vitro situace. To umožňuje reprodukovatelně simulovat řad i patologických situací a jejich potenciální ovlivnění nově vyvíjeným léčivem, které na ji nejsou z etických důvodů možné. Přístroj xCELLigence RTCA (Real Time Cell Analyzer) umožňuje průběžně, neinvazivně a bez z růst buněk, morfologii, viabilitu, proliferaci i migraci, a to i po dobu několika dní. Sys speciálních tzv. E-destiček, které mají na dně umístěné biosenzory založené na zlatých mik Princip stanovení spočívá v měření impedance (elektrického odporu). Čím silněji či ve větš adherují na povrch destičky, tím větší je odezva přístroje. V důsledku toho je xCELLigence monitorovat cytotoxické reakce i změny tvaru a pohybu buněk vyplývající z výjimečně široké molekulárních cílů. *========================================================================================= * UV-VIS spektrofotometr *========================================================================================= UV-VIS spektrofotometr BK-V1800 umožňuje stanovovat vlastnosti vzorku, zejména koncentraci látky v roztoku, na základě pohlcování světla v různých vlnových délkách spektra. Jedná se něhož lze libovolně nastavit vlnovou délku monochromatického světla. Principem je ozáření monochromatickým světlem (UV/VIS oblast elektromagnetického spektra), přičemž světelné zář analytu absorbováno. Nedílnou součástí je proto fotodetektor, který měří intenzitu dopadaj neabsorbovaného roztokem. Množství absorbovaného záření je úměrné koncentraci látky ve stu UV-VIS spektrofotometr BK-V1800 je nezbytný pro kvalitní přípravu vzorků a praktická měřen laboratoři průtokové cytometrie prováděna studenty doktorského studia. *========================================================================================= * Průtokový cytometr *========================================================================================= Průtoková cytometrie je moderní, stále se rozvíjející multiparametrická bioanalytická meto umožňuje v reálném čase stanovit velikost a morfologické charakteristiky buněk, spolu s an specifických protilátek nebo fluorescenčních sond. Průtoková cytometrie je metodou schopno komplexní kvalitativní i kvantitativní informace o charakteru vyšetřovaných buněk. Tyto in nezbytné pro studium odpovědi buněk in vitro a in vivo na působení látek s potenciálním bi významným účinkem. Vlastní analyzátor využívající principů průtokové cytometrie se nazývá cytometr. V rámci laboratoře slouží průtokový cytometr k multiparametrické analýze fenotyp proliferace, genové exprese povrchových nebo intracelulárních znaků, apoptózy a distribuce jednotlivých fázích buněčného cyklu. Analyzovány jsou buňky zdravých dárců, primární a nád linie. Průtokový cytometr CytoFlex LX je vybaven čtyřmi excitačními lasery (355, 405, 488 čtrnácti fluorescenčními detektory. Průtokový cytometr CytoFlex LX je unikátní zejména výj citlivostí, 7dekádovým zobrazením, rychlostí měření až 30 000 událostí/sekundu a schopnost malé buňky a mikropartikule pod 0,2 ?m. Buněčný analyzátor využívají studenti při řešení v projektů a realizaci laboratorních experimentů spojených s vypracováním disertační práce. *========================================================================================= * Multifunkční destičkový reader Spark *========================================================================================= Reader Spark představuje modulární reader, který díky kombinaci principiálně rozdílných sp optických metod umožnuje řadu multiparametrických buněčných analýz. Přístroj využívá detek (UV/VIS spektra), fluorescence a luminiscence. Kombinace monochromátorů a interferenčních během volby vlnové délky zaručuje multifunkcionalitu readeru a umožňuje realizaci pokročil fluorescenčního měření. Přístroj dále využívá termostatování měřícího prostoru, kontrolu i koncentrace CO2, zobrazování živých buněk a jejich konfluenci. To komplementárně s využití cytometru umožňuje studentům doktorského studia realizovat vlastní vědecky produktivní prá moderního biomedicínském výzkumu. *========================================================================================= * Chlazená stolní centrifuga *========================================================================================= Chlazená stolní centrifuga Rotina 420 R je vyvinuta pro potřeby biochemických laboratoří a tkáňových kultur. Centrifugace s využitím chlazené stolní centrifugy Rotina 420 R umožňuje oddělit jednotlivé složky suspenze na základě rozdílných hustot. Chlazená stolní centrifug umožnuje nejen práci s buněčnými kulturami v rámci laboratoře průtokové cytometrie, ale je některým zvláštním preparativním a analytickým účelům, jako je separace buněk, nebo jejich specifických sond a protilátek. *========================================================================================= * Inkubátor CO2 *========================================================================================= Lidské buněčné linie představují základní experimentální modely používané v aktuálním výzk linie se uchovávají a pomnožují se ve k tomu určených speciálních inkubátorech CO2, které dovedou zajistit veškeré podpůrné podmínky nutné pro kultivaci. Inkubátory CO2 udržuji sta 37 °C blízkou tělesné teplotě zdrojového organismu. Atmosféra inkubátoru se přísně reguluj o oxid uhličitý, obvykle obsahuje 5 % CO2. Zvýšená tenze CO2 v inkubátoru se nezbytně podí pH médií s bikarbonátovým pufrem. Kromě toho vyšší tenze rozpuštěného CO2 v médiu lépe odp v extracelulární tekutině. Inkubátor tak musí být vybaven zařízením pro regulaci koncentra nedocházelo ke ztrátě vody z kultivačního média, a nedocházelo tak ke změně zastoupení jeh udržuje se relativní vlhkost atmosféry okolo 90 %. V rámci kurzu budou studenti pracovat s nádorovými buněčnými liniemi, které budou kultivovány in vitro v inkubátoru pro buněčné ku atmosférou CO2. Autoři textu: prof. MUDr. Martina Řezáčová, Ph.D., RNDr. Radim Havelek, Ph.D.