Laboratoř molekulární patologie












            ******************************************************************************************

            *
            ******************************************************************************************
                                                                            
            Rok pořízení           2019 - 2021                              
            Financování            OP VVV CORE FACILITIES [ URL "LFHK-192.html "]
                                   CZ.02.1.01/0.0/0.0/16_017/0002515        
                                                                            
            Zodpovědná osoba       prof. MUDr. Aleš Ryška, Ph.D. [ URL "https://
                                   orcid.org/0000-0002-3051-2280"]          

            Pokročilé metody v patologii (imunohistochemie a imunocytochemie, in situ hybridizace, mol

            vždy navazují na základní morfologické metody (barvení hematoxylinem-eozinem) a vycházejí 
            preparátu zhotoveného buď z parafínového bloku, nebo ze zmraženého materiálu.

            Základem zpracování tkáně v dnešní době je metoda FFPE (formalin fixed paraffin embeded). 
            zpracování je hodnocená tkáň fixována formalínem a následně odvodněna a prosycena parafíne
            zalita do parafínových bloků a z nich jsou zhotovovány tkáňové řezy, které jsou opětovně z

            nejprve obarveny základním barvením. Vzniklé parafínové bloky je možné uchovávat (s minimá
            kvality obsažené tkáně) po mnoho let a lze na ně aplikovat případné další potřebné testy i
            velkým časovým odstupem. Jde o metodu zpracování, která je používána celosvětově, po mnoho

            dostupná vybavením i finančně.
            Základním barvením histologických řezů je barvení hematoxylin-eozin (HE) a jeho modifikace
            barvení se bazické oblasti tkáně (typicky jádra) barví hematoxylinem (modrá až modrofialov

            eozinofilní oblasti (typicky cytoplazma a obecně oblasti bohaté na bílkoviny) barví v odst

            Výhodami barvicí a montovací linky je Tissue-Tek Prisma Plus jsou vysoká kapacita, plynulé

            barvených skel, možnost nastavení celé řady barvicích programů (optimální obarvení různých
            montování preparátů pod speciální fólii (místo krycího skla).


            Preparáty obarvené základním barvením (HE) jsou předkládány lékaři a ten, teprve po jejich
            identifikaci hlavních oblastí zájmu zadává požadavky na pokročilé metody.


            Výhodou „doublehead“ mikroskpu (mikroskopu se zařízením pro simultánní pozorování školitel
            mikroskopický preparát mohou pozorovat dva lidé současně. Školenec se tak může od školitel
            prakticky způsob a metody pozorování mikroskopického preparátu. Badatelské mikroskopy se z

            simultánní pozorování kladou obecně vysoké nároky na kvalitu mikroskopu, a to především vy
            (s převodem světla ke spolupozorovateli) a možnosti individuálního přizpůsobení mikroskopu
            školených osob (střídání se u mikroskopu).


            Získání dostatečného množství nukleové kyseliny je jednou za základních podmínek každé mol
            biologické analýzy. Nukleové kyseliny (DNA/RNA) se nacházejí v buňce v buněčném jádře, mit

            cytosolu, ribozomech. Při procesu izolace je nutné nukleové kyseliny uvolnit z těchto stru
            purifikovat od proteinů a iontů, které by mohly interferovat při molekulárně biologických 
            Způsob izolace nukleových kyselin se liší především podle druhu zdrojového biologického ma

            tkáňový blok, cytologický nátěr, cytospin, nativní tkáň, suspenze buněk v transportním méd
            Společnou součástí všech izolačních postupů je lýza buněk, uchycení nukleové kyseliny na m
            kolonky nebo magnetických kuličkách, vymytí kontaminujících složek a závěrečná eluce čisté

            kyseliny. Izolovaná DNA je ve formě roztoku uchovávána při -20°C.

            Automatický izolátor nukleových kyselin MagCore. K purifikaci nukleových kyselin využívá j

            na magnetické kuličky. Každá izolace probíhá na samostatné jednorázové izolační patroně. V
            minimalizace cross- kontaminace vzorků a snížení hands- on- time.


            Základní metodou molekulární biologie, od které jsou odvozeny všechny další genové analýzy
            polymerázová řetězová reakce). Jedná se o metodu, která souží k amplifikaci vybraného úsek
            jedné molekuly DNA vznikne během dvou hodin cca bilión kopií. Principem PCR je opakovaná r

            nukleových kyselin. Proces je velmi citlivý na kontaminaci, proto je nutné všechny kroky p
            prostorách, umožňujících pravidelnou sterilizaci pracovních ploch a předmětů pomocí ultraf
            PCR dekontaminační box, uzavřený prostor pro přípravu PCR mastermixů (vlevo) a laminární b

            práci s nukleovými kyselinami (vpravo).

            Autor textu: MUDr. Petra Kašparová, Ph.D a RNDr. Hana Vošmiková